Cultivos de Queratinocitos

¿Qué es un cultivo de queratinocitos?

El cultivo de queratinocitos es una técnica descrita hace más de veinte años que se ha convertido en una poderosa arma en el tratamiento del paciente que presenta quemaduras extensas, las láminas de queratinocitos funcionan como un autoinjerto epidérmico cultivado, para lo cual los queratinocitos se cultivan en láminas de células estratificadas partiendo de una biopsia de piel del mismo paciente receptor y utilizando diferentes tipos de soportes. Sobre esta misma capa, simulando la epidermis, se siembran queratinocitos autólogos en distinto grado de maduración. Otro enfoque para el reemplazo celular epidérmico es el uso de cultivos de queratinocitos autólogos en suspensión, que pueden ser rociados la herida inmediatamente después de haber sido preparados.

Entre las diversas prácticas de modificación

El cultivo de tejidos se inició a principios del siglo XX, como un método para estudiar comportamiento de células animales fuera de las variaciones sistémicas que pueden ocurrir. Debido a que la técnica predominante durante 50 años fue el cultivo de fragmentos no disgregados de tejido, el término cultivo de tejidos se ha utilizado para englobar las técnicas de cultivo de órganos, el propio cultivo de tejidos y el cultivo celular. El cultivo celular consiste en un procedimiento tecnológico de mantenimiento y estudio de células vivas en un medio artificial, donde se procura reproducir las condiciones biológicas originales en las que se desarrollan las células. Pueden ser modificados por diferentes métodos, el más utilizado para estudios preclínicos como clínicos, se basa en vectores retrovirales.

Pero ¿Bajo qué técnica se modifica?

Las láminas de submucosa intestinal porcina fueron deshidratadas y esterilizadas con óxido de etileno, antes de la siembra de queratinocitos se hidrataron con suero fetal bovino y antibiótico. Cultivaron las células en un medio de crecimiento libre de suero, con insulina, factores de crecimiento EGF y FGF-2, en tres áreas diferentes para medir y teñir las colonias, para los cultivos sobre submucosa y para la expansión celular, los cultivos se mantuvieron en atmósfera húmeda a 37° con 5% de CO2. El conteo de colonias consideró la cantidad de colonias por cm2 aproximando de acuerdo con el área calculada de la superficie de cultivo para cada caja. Para visualizar las colonias de queratinocitos se utilizó Rodamina B en el cultivo primario.

La viabilidad y el crecimiento celulares sobre la submucosa intestinal se evaluaron con la técnica de MTT 3--2, 5-diphenyltetrazolium bromide, empleando isopropanol con HCl 0,04 M para romper las células y obtener extractos celulares, después de la tinción con MTT y solubilizar los precipitados violetas intercelulares.

Los atributos de su elección En relación con los injertos cultivados in vitro, es importante considerar el tiempo que se requiere para alcanzar la confluencia necesaria para utilizar el cultivo de las células, lo cual debe estar sincronizado con los requerimientos de los pacientes, se ha reportado que el autoinjerto debe ser utilizado en un periodo de 2 a 3 días para adherirse satisfactoriamente al lecho de la herida. Se ha observado que la toma del autoinjerto es más exitosa en pacientes jóvenes, debido al estado fisiológico de sus células y su mayor capacidad de respuesta para la toma del injerto.

Pero claro existen fallas en el sistema… Para empezar uno de los problemas más grandes del cultivo de queratinocitos comparado con otros métodos es que este conlleva un proceso largo de tres a cuatro semanas desde que se toma la muestra de las células del paciente, también otra desventaja que se encuentra es que los cultivos de queratinocitos siguen teniendo fragilidad a largo plazo. En un estudio realizado entre 2011 y 2015 con 21 pacientes tratados en el centro de quemados del Hospital Universitario La Paz en Madrid, España donde 16 eran varones y 5 mujeres a los cuales 10 recibieron queratinocitos y 11 solo recibieron autoinjertos, se concluyeron varios aspectos de acuerdo a estadísticas realizadas. El número de transfusiones requeridas en los pacientes tratados con queratinocitos fue mayor y a su vez el número de casos de neumonía. Los días de ventilación mecánica con los cultivos de queratinocitos fue mayor en comparación con los autoinjertos . A su vez el número de días de estancia en Unidad de Cuidados Intensivos y el número de días de estancia hospitalaria global fue mayor en los pacientes con cultivos de queratinocitos. Otra desventaja que se puede ver de acuerdo con uno de los estudios sobre queratinocitos es que se produce infecciones en el 92% de los pacientes y en otro 66.7% de los casos, estos pacientes presentan graves secuelas por quemaduras por lo que se requiere estancia mayor en Unidad de Cuidados Intensivos durante varios días. Como siguiente desventaja es que en el caso de los queratinocitos la tasa de prendimiento suele ser menor debido a que en varias ocasiones se produce pérdida de este, lo que provoca una nueva intervención quirúrgica, aunque este factor puede deberse a la profundidad y extensión de dichas quemaduras.

Referencias

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